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細(xì)胞培養(yǎng)常見污染的識(shí)別及處理 @遠(yuǎn)慕新聞
閱讀次數(shù):672 發(fā)布時(shí)間:2020/4/23 10:15:41
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1、細(xì)菌:

識(shí)別:細(xì)菌在顯微鏡下為黑色細(xì)沙狀,根據(jù)感染細(xì)菌的不同,可有不同的外形,有球形,鏈形,桿形等。大家不必深究。只要發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)液渾濁變黃,培養(yǎng)瓶頂部有一層細(xì)沙一樣的東西。就知道大事不好啦。見下圖。

處理:可在培養(yǎng)液中加相應(yīng)的抗生素處理?梢杂盟沫h(huán)素,慶大霉素,或者鏈霉素,前兩者的工作濃度是50 μg/mL;鏈霉素的工作濃度是100 μg/mL。其實(shí),毛毛蟲說句實(shí)話,一旦發(fā)生污染,就已經(jīng)大勢(shì)已去了。如果細(xì)胞不是特別特別珍貴的話,還是趁早扔了,重起爐灶吧。

所以,*重要的還是防范于未然。做好培養(yǎng)間,CO2孵箱,器皿和培養(yǎng)液的消毒滅菌工作。在操作的時(shí)候,嚴(yán)格執(zhí)行無菌操作規(guī)范。

2、霉菌

識(shí)別:因?yàn)榕囵B(yǎng)液是清亮的,所以霉菌污染非常難以早期發(fā)現(xiàn),等發(fā)現(xiàn)時(shí)往往已經(jīng)為時(shí)過晚了。培養(yǎng)液中慢慢地出現(xiàn)絮狀雜質(zhì),鏡下可見呈細(xì)絲狀的團(tuán)狀漂浮物,如同風(fēng)中柳絮。細(xì)胞仍可生長(zhǎng),但時(shí)間一長(zhǎng),細(xì)胞的狀態(tài)就變差。見下圖。

處理:細(xì)胞一旦被霉菌污染,很難挽救,兩性霉素B或制霉菌素都于事無補(bǔ),建議果斷舍棄該污染細(xì)胞,將環(huán)境徹底消毒。

采用酒精徹底底地擦洗一遍CO2孵箱。然后再用新潔爾滅擦洗一遍。把水盤里加上飽和量的硫酸銅。

3、支原體:

識(shí)別:多為多邊形,培養(yǎng)液一般會(huì)變渾濁。支原體感染細(xì)胞以后,細(xì)胞病變不很明顯,只是和你一起慢慢變老。支原體污染后,可影響所有的細(xì)胞生長(zhǎng)參數(shù)。故進(jìn)行實(shí)驗(yàn)前,必須確認(rèn)細(xì)胞為mycoplasma-free,實(shí)驗(yàn)結(jié)果之?dāng)?shù)據(jù)方有意義。

處理:沒有什么好處理的。直接扔了吧。

4、黑蛟蟲:

識(shí)別:誰都不知道所謂的“黑膠蟲”是什么東西。據(jù)說是納米級(jí)的細(xì)菌。低倍下為黑色點(diǎn)狀,高倍下可看見黑色的小蟲游來游去。培養(yǎng)液也是不渾的,一般不會(huì)太影響。但是如果太多了,也會(huì)影響細(xì)胞生長(zhǎng)和實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

處理:因?yàn)楦静恢肋@是什么物種,所以也談不上什么處理方式。建議如果細(xì)胞有可能是此種污染的話,可以增加細(xì)胞的種板密度,以提高細(xì)胞的生存率。

5、真菌:

識(shí)別:真菌污染和霉菌污染差不多。一般培養(yǎng)液清亮,所以很難早期發(fā)現(xiàn)。鏡下有時(shí)候象絲狀,有時(shí)候象珊瑚狀。慢慢地會(huì)長(zhǎng)出很細(xì)的黑色絲狀物。這個(gè)時(shí)候,已經(jīng)晚了,細(xì)胞很難救活了。

處理:同霉菌污染一樣,沒有什么好處理的,直接扔了吧。然后徹底消毒滅菌培養(yǎng)間,CO2孵箱,器皿和培養(yǎng)液。

綜上所述,兩個(gè)原則:預(yù)防為主,果斷扔掉。如果細(xì)胞實(shí)在特別特別特別珍貴。那就只好死馬當(dāng)活馬醫(yī)了。用廣譜抗生素5倍推薦濃度沖擊一下。當(dāng)然細(xì)胞狀態(tài)差的話不一定熬得住。同時(shí)增加傳代時(shí)的細(xì)胞的密度,培養(yǎng)基中的血清濃度,勤換液。也可以不加抗生素進(jìn)行單克隆有限稀釋至96孔板,再克隆化。
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