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實(shí)驗(yàn)方法原理 培養(yǎng)基是人工合成的種混合營(yíng)養(yǎng)料，用于分離培養(yǎng)細(xì)菌。常用的有基礎(chǔ)培養(yǎng)基、營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基、選擇培養(yǎng)基等。

試劑、試劑盒

牛肉/膏 蛋白胨 氯化鈉 蒸餾水 瓊脂 NaOH 酚紅指示劑

儀器、耗材

pH 試紙 三角燒瓶 量筒 天平 吸管

實(shí)驗(yàn)步驟

1.  稱取牛肉/膏3 g，蛋白胨10 g，氯化鈉5 g 加入1 000 ml 蒸餾水中，加熱溶化。

2.  待冷至40－50℃時(shí)，測(cè)定并矯正酸堿度為pH7.6。通常未矯正的肉膏湯均呈酸性，故常用1/10 M NaOH 溶液進(jìn)行矯正。

3.  酸堿度調(diào)整后，煮沸3－5 分鐘，補(bǔ)足因蒸發(fā)失去的水量，待冷卻后用濾紙使之過濾澄清。并重新測(cè)定酸堿度次，若變動(dòng)較大，應(yīng)再進(jìn)行矯正。

4.  按應(yīng)用時(shí)的需要量分裝于適當(dāng)?shù)脑嚬芑驘�瓶�(jī)?nèi)，塞上硅膠塞并用牛皮紙包扎，置高壓蒸汽滅菌器內(nèi)，經(jīng)103.4 kpa、121.3℃、20 分鐘滅菌。

5.  滅菌后取出培養(yǎng)基，待冷至40℃以下時(shí)，放入37℃溫箱24 小時(shí)做無菌試驗(yàn)，如無菌生長(zhǎng)，即可備用。
 

眾所周知，培養(yǎng)基是微生物生長(zhǎng)、繁殖和代謝的混合營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)培養(yǎng)基。由于微生物的營(yíng)養(yǎng)類型不同，對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的要求不同，實(shí)驗(yàn)研究目的不同，所以培養(yǎng)基種類繁多，原料也不同。為了達(dá)到實(shí)驗(yàn)和研究的目的，應(yīng)該按照培養(yǎng)基的配方進(jìn)行配制。

任何種培養(yǎng)基旦制成，都要及時(shí)徹底滅菌，以便進(jìn)行純培養(yǎng)。培養(yǎng)基培養(yǎng)基滅菌般采用高壓蒸汽。那為什么培養(yǎng)基準(zhǔn)備好后定要馬上滅菌呢？

在發(fā)酵過程中，培養(yǎng)基滅菌主要有幾個(gè)原因如果不滅菌，會(huì)因雜菌的消耗而損失生物反應(yīng)的底物或產(chǎn)物培養(yǎng)基，導(dǎo)致生產(chǎn)能力下降

雜菌還會(huì)產(chǎn)生代謝產(chǎn)物，使產(chǎn)品提取更加困難，導(dǎo)致產(chǎn)量較低，產(chǎn)品質(zhì)量較低

大量雜菌繁殖后，反應(yīng)液的pH值會(huì)發(fā)生變化，反應(yīng)會(huì)出現(xiàn)異常

些雜菌會(huì)分解產(chǎn)品，使生產(chǎn)失敗培養(yǎng)基

如果出現(xiàn)噬菌體污染，產(chǎn)生細(xì)菌的細(xì)胞將被裂解，生產(chǎn)將失敗。

培養(yǎng)基的滅菌是為了殺死培養(yǎng)基中的原生菌或附著在空氣中的混合菌培養(yǎng)基，使目標(biāo)菌更好的生長(zhǎng)(減少混合菌對(duì)培養(yǎng)基中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消耗，有些混合菌會(huì)抑制你的目標(biāo)菌的生長(zhǎng))。般來說，培養(yǎng)基人工培養(yǎng)的細(xì)菌基本上允許快速生長(zhǎng)或盡可能產(chǎn)生代謝產(chǎn)物，因此允許它們?cè)诩雅囵B(yǎng)基上生長(zhǎng)，以減少培養(yǎng)時(shí)間，提高經(jīng)濟(jì)效益。檢查培養(yǎng)基滅菌效果的方法將培養(yǎng)基放入培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)(時(shí)間與培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)致，般為24小時(shí))，看滅菌后的培養(yǎng)基菌落即可判斷。

有時(shí)候?yàn)榱烁�科學(xué)的使用培養(yǎng)物，培養(yǎng)基方面培養(yǎng)基會(huì)在空氣中被氧化，造成營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的流失

另方面，放置會(huì)導(dǎo)致細(xì)菌繁殖，培養(yǎng)基消耗養(yǎng)分培養(yǎng)基。