重組
蛋白的產(chǎn)生是應用了重組DNA或重組RNA的技術(shù)從而獲得的蛋白質(zhì)。體外重組蛋白的生產(chǎn)主要包括四大系統(tǒng):原核蛋白表達，哺乳動物細胞蛋白表達，酵母蛋白表達及
昆蟲細胞蛋白表達。
重組蛋白獲得途徑：重組蛋白需要使用表達系統(tǒng)來對其進行制備，其獲得途徑可以分為體外方法和體內(nèi)方法。兩種方法的提都是應用基因重組技術(shù)，獲得連接有可以翻譯成目的蛋白的基因片段的重組載體，之后將其轉(zhuǎn)入可以表達目的蛋白的宿主細胞從而表達特定的重組蛋白分子。
體外重組蛋白的生產(chǎn)主要包括四大系統(tǒng)：原核蛋白表達（常用的大腸桿菌蛋白表達），哺乳動物細胞蛋白表達（常用的細胞CHO，HEK293），真核表達系統(tǒng)（酵母）及昆蟲細胞蛋白表達。合適表達系統(tǒng)的選擇取決于重組蛋白的特性、重組蛋白的預期應用以及該系統(tǒng)能否生產(chǎn)足夠量的蛋白質(zhì)，根據(jù)自身的下游運用選擇合適的蛋白表達系統(tǒng)，提高表達成功率。
重組蛋白表達系統(tǒng)：（1）目應用廣泛的表達系統(tǒng)有三大類，大腸桿菌(Esherichia coli)表達系統(tǒng)、酵母表達系統(tǒng)、CHO細胞表達系統(tǒng)。其中，大腸桿菌是表達重組蛋白常用的宿主菌，已應用于許多具有重要藥用價值蛋白的生產(chǎn)。
大腸桿菌表達系統(tǒng)具有許多優(yōu)點，如生長快、培養(yǎng)成本低廉、遺傳背景清楚和易實現(xiàn)高密度培養(yǎng)等。大腸桿菌DH5α是一種誘變菌株，主要表現(xiàn)對外源DNA的免疫缺乏。大腸桿菌DH5α是基因工程常用的宿主菌，相比于正常菌種缺少了一定的免疫機制。
（2）不同的表達系統(tǒng)和培養(yǎng)方法顯著影響下游的處理過程，目標蛋白表達是否形成包涵體，目標蛋白表達的定位（胞內(nèi)、細胞膜內(nèi)、周質(zhì)空間和胞外），蛋白表達的量都依賴于所選擇的的表達系統(tǒng)。
重組蛋白表達系統(tǒng)
重組蛋白種類：目比較熱門的重組蛋白主要為細胞因子類，而細胞因子主要包括如下：
按功能分，可分為以下幾種：
1、白細胞介素（Interleukin，IL）
由多種細胞產(chǎn)生并作用于多種細胞的一類細胞因子。由于初是由白細胞產(chǎn)生且又在白細胞間發(fā)揮作用，所以得名，現(xiàn)仍沿用此名。
2、干擾素（interferon，IFN）
具有干擾病毒復制的能力，故得名。其具有十分廣泛的生物活性，在免疫應答和免疫調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用，也是主要的促炎細胞因子。干擾素分為：I型（7種，如IFN-α和IFN-β）和II型（僅有IFN-Y）。
3、腫瘤壞死因子（tumor necrosis factor，TNF）
由于在體內(nèi)外均可直接殺傷腫瘤細胞而得名。其家族成員約有30個。
主要成員：
（1）TNF-α，一種單核因子主要由單核細胞和巨噬細胞產(chǎn)生；
（2）TNF-β，一種淋巴因子，主要由淋巴細胞、NK細胞等產(chǎn)生，其生物學活性與TNF-α相類似。
4、集落刺激因子（colony stimulating factor，CSF）
一組在體內(nèi)外均可選擇性刺激造血祖細胞增殖、分化并形成某一譜系細胞集落的細胞因子，包括巨噬細胞CSF、粒細胞CSF、巨噬細胞/粒細胞CSF、干細胞因子等。
5、生長因子（growth factor，GF）
一類可介導不同類型細胞生長和分化的細胞因子，根據(jù)其功能和所作用細胞的不同，分別命名為轉(zhuǎn)化生長因子（TGF）、神經(jīng)生長因子（NGF）、表皮生長因子（EGF）、血管內(nèi)皮細胞生長因子（VEGF）、成纖維細胞生長因子（FGF）等。
6、趨化性細胞因子（chemokine）
一類對不同靶細胞具有趨化效應的細胞因子家族，可由白細胞和某些組織細胞分泌，是一個包括60多個成員的蛋白質(zhì)家族。大部分成員含4個保守的半胱氨酸（cysteine，C）根據(jù)其N端半胱氨酸的排列方式，可分為CXC、CC、C、CX3C四個亞族。
客服一
