大腸菌群測定標準取樣原則、常見問題
閱讀次數(shù):703 發(fā)布時間:2022/1/18 10:07:37
大腸菌群MPN法
1、取樣原則:本標準中對應的檢樣量分別為0.1g(mL)、0.01g(mL)、0.001g(mL),根據(jù)樣品限量值,查閱附錄部分MPN表:
(1)無論固體或液體,當限量值為“<3.0”或其它任意能在標準“表1”中查到的數(shù)值,則分別取1mL 1:10的樣品勻液接種到3管單料LST肉湯管、分別取1mL 1:100的樣品勻液接種到3管單料LST肉湯管、分別取1mL 1:1000的樣品勻液接種到3管單料LST肉湯管;
(2)無論固體或液體樣品的限量值為“<0.3”或其它任意為MPN表中查到的數(shù)值縮小10倍的數(shù)值,則分別取10mL樣品1:10稀釋液接種到3管雙料LST肉湯管、分別取1mL 1:10的樣品勻液接種到3管單料LST肉湯管、分別取1mL 1:100的樣品勻液接種到3管單料LST肉湯管(如蜂蜜的限量值為0.3MPN/g,即采取此做法)。
2、凡產酸或產氣的LST管,都取1環(huán)接種GBLB肉湯管,凡BGLG產氣者記為陽性。
大腸菌群平板計數(shù)法(常見問題匯總)
1、VRBA培養(yǎng)相關問題
(1)所用器皿是否需要滅菌?
答:不需要。配制培養(yǎng)基所用到的錐形瓶、玻璃棒、勺子等均不需要滅菌,但要求一定要清洗干凈,表面無污漬、無殘留。煮沸完成后,取下錐形瓶,用一般常用的衛(wèi)生紙(軟紙)覆蓋瓶口,用橡皮筋纏繞,待冷卻至適宜溫度即可傾注培養(yǎng)基。在傾注培養(yǎng)基時,須點燃酒精燈,稍微灼燒錐形瓶口。
(2)如何保持“煮沸2min”?
答:可以用電磁爐或電熱板進行加熱煮沸,在該培養(yǎng)基即將煮沸時調低溫度。實際操作時,不需要嚴格按照此要求進行,加熱煮沸數(shù)即可。原因:本培養(yǎng)基很難保持煮沸2min,一旦煮沸,則培養(yǎng)基很快上涌、翻騰,若不調低溫度或立刻采取其他措施,則培養(yǎng)基可在數(shù)內噴涌出來,嚴重者可噴涌2米以上、電磁爐周圍1—2米范圍內都是培養(yǎng)基飛濺的范圍(實驗室危險因子)。
(3)若培養(yǎng)基未用完,是否可以冷藏起來下次用?
答:不可以。4789.28中已規(guī)定,固體培養(yǎng)基多允許熔融1次(指的是經過高壓滅菌冷卻后的培養(yǎng)基還可以熔融一次后使用)。且VRBA培養(yǎng)基冷卻后,再次熔融時非常容易噴涌,若溫度控制不當,底部培養(yǎng)基熔融后很快就會發(fā)生噴涌(即培養(yǎng)基未完全熔融就會發(fā)生噴涌現(xiàn)象)。
(4)傾注完成后是否需要“覆蓋一層”?如何覆蓋?
答:一般情況下不需要覆蓋。在實際操作過程中,若檢驗員初次接觸該食品(或食品品類),則有必要在傾注培養(yǎng)基后再覆蓋一層(原因是不清楚該樣品是否會發(fā)生蔓延)。而如此往復測試幾次后,若該樣品或食品品類均不存在蔓延現(xiàn)象,則以后的實驗中都不需要進行覆蓋。若重復多次測試后都有蔓延現(xiàn)象,則以后的檢驗中好都進行覆蓋,好是在原培養(yǎng)基已凝固或半凝固(不會發(fā)生晃動)時再傾注一層培養(yǎng)基(“一層”是指緩慢傾注培養(yǎng)基至培養(yǎng)基剛好能夠覆蓋整個平皿)。
2、如何確定培養(yǎng)基上長的是不是大腸菌群?
答:建議新手們認真按照標準進行證實試驗,此證實試驗簡單易操作,每一次VRBA上有菌落生長都進行證實試驗,如此往復3-4次,對于哪種形態(tài)才是大腸菌群已經能夠了然于心。